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從轉子上小心拿開離心管

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從轉子上小心拿開離心管

發布日期:2020-10-16 作者: 點擊:

使用此獨特的轉子非常有必要。341 650g (Optima L-90K超速離心機),18C離心至少8h。可過夜離心。


1. 從轉子上小心拿開離心管,注意不要破壞梯度。用23G針頭在離心管頂部穿孔。用長波紫外線,用一個斜麵向上的18G針頭小心移除發光的DNA條帶。通常會有兩條帶。選擇底部的條帶。


上麵的條帶是降解的DNA,而底下的條帶是完整的環狀BACDNA。被移除的條帶的體積大約為200uL。不要取液超過200uL,不然你將得到-部分頂部降解的條帶。轉移DNA到一個15mL的Falcon管,用1XTE緩衝液補足總體積到2mL。


2.加入等體積的NaCl飽和丁醇到DNA溶液中,輕輕混合。靜置混合物30s,使其分離。移除並丟棄上層。抽提溶液4~5次,直到不再有粉紅色。


3.轉移DNA溶液到一個30mL圓底離心管中,加入1lmL dH2O到溶液中,接著加入2.5~3.0體積的100%乙醇。混合並在- 20'C溫育30min。16 417g, 4'C 離心溶液30min以沉澱DNA (J-25I Beckman Avanti 離心機,JA-25.50 轉子)。


4.倒掉乙醇,重懸DNA於0.5 mL的0.3 mol/L乙酸鈉中。轉移溶液到一個1.5mL微量離心管中,加入1mL 100%乙醇。用微型離心機,20 617g, 4'C 離心溶液30min。


▲因為BAC DNA對剪切力敏感,應該使用帶有寬孔吸頭的移液器來轉移DNA。


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